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牡丹种植

牡丹组培苗繁育技术规程(2稿)

Q/YQ   GSMD JS 009—2014
1 范围
本标准规定了牡丹组培苗有关的术语和定义、繁育工厂、组织培养快繁技术、组培苗标准的要求。
本标准适合用于牡丹组培苗繁育。
2 术语与定义
2.1 组织培养 tissue culture
是指在无菌条件下,创造植物生长最适的环境条件,采用人工配制的营养基对离体的植物器官、组织、细胞和原生质体进行培养,最后形成完整植株的过程。
2.2 组培苗 tissue culture seedling
通过组织培养技术,将植物的体细胞、组织或器官进行离体培养,经过不同的细胞分化途径重建形成不同的器官,诱导培育出的完整植株。
2.3 外植体 explant
用于离体培养的初始材料称为外植体。
2.4 从生芽 shoot clusters
由植物器官和愈伤组织发育出来的群体丛生芽苗。
2.5 培养基 medium
培养基是供微生物、植物组织生长和维持用的人工配制的养料,一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)以及维生素和水等。
2.6 初代培养 initial culture
又称诱导培养,指组织培养过程中,将初始外植体在无菌条件下培养以产生不定芽、愈伤组织、原球茎,从而建立无菌培养的培养阶段。
2.7 继代培养 subculture
将培养物转移到新的培养基上继续培养的过程。
2.8 生根培养 rooting culture
将成丛的试管苗分离成单苗,转接到生根培养基上,在培养容器内诱导生根的方法。
2.9 炼苗移栽 acclimatization and transplanting
将组培苗从培养室里移出(苗没有从瓶中取出),将其放置在即将移栽的环境中,慢慢适应一个新的生存生长环境,再将其从瓶中取出移栽到基质中的过程。
3 种苗繁育工厂
3.1 准备室
完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、配制、培养基分装等的场所。
3.2 接种室
主要用于植物材料的消毒、接种和培养物的继代转移等的场所。
要求:无尘、无对流空气的洁净环境。进入室内的工作人员应换上洁净的工作服、工作帽和拖鞋,避免带入杂菌引起空气污染。
3.3 培养室
培养试管苗的场所,卫生保持清洁干净,内置多层培养架。
培养条件:温度24±1℃;生根培养为暗培养,其余培养光照强度50 μmolžm-2žs-1,光照时14h/d。
3.4 仪器设备
主要有高压灭菌锅、超净工作台、药品柜、冰箱、电炉、电子天平、台秤、搅拌器、sK 计、摇床、烧杯、培养皿、三角瓶、量筒、容量瓶、磨扣试剂瓶、滴管、手术刀、镊子、剪刀、接种针、酒精灯等设备。
4 牡丹组织培养快繁技术
4.1 母本园的选择
母本园需是无病虫害的正常管理牡丹园。
4.2 母株的确定
选择品种纯正、农艺性状优良、生长健壮、无病虫害的植株作为母株,并逐株编号及跟踪观察。
4.3 外植体取材与处理
早春切取饱满鳞芽,剥去芽外数层芽鳞后,以自来水冲洗30min,再用洗涤剂浸泡8~10 min,然后在超净工作台上以70%的酒精浸泡灭菌20~30 s,再用2%次氯酸钠浸泡灭菌13 min,最后,用无菌水冲洗3~5次。
4.4 初代培养
外植体消毒灭菌后接入初代培养基。
初代培养基:WPM+BA 0.5 mg · L-1+GA3 0.2 mg · L-1+蔗糖30.0 g · L-1+琼脂6.0 g · L-1,pH=5.8。
4.5 继代培养
将初代培养获得的从生芽按图1的方法切分获得标准单芽和芽原座,转入继代培养基中培养,40 d后获得从生芽,同样按图1的方法据切分获得标准单芽和芽原座:
① 标准单芽:茎长≥1.0cm,叶片数≥3的健壮芽。
② 标准芽原座:带有1-3个小芽,面积≈0.25 cm2的小芽丛。
培养基:可用初代培养基,添加适量的有机添加物,随着增殖次数的增加,激素浓度需适当下调,否则易使培养物出现畸形,最终导致组培苗变异。
 
 
4.6 壮苗培养
将继代培养获得的标准单芽转入不加任何激素的壮苗培养基中培养。
培养基:MS培养基,可根据种苗长势添加适量有机添加物,经过20 d的培养可长成高度约 3~5 ㎝的健壮单株。
4.7 生根培养
将健壮单株接入生根培养基,采用两部生根法(根诱导培养30 d、根形成培养20 d)。
(1)根诱导培养基:1/2MS+IBA 1.0 mg · L-1+蔗糖30.0 g · L-1+琼脂6.0 g · L-1,pH=5.8。
(2)根形成培养基:1/2 MS+活性炭4.0 g · L-1+琼脂6.0 g · L-1,pH=5.8。
4.7 炼苗移栽
将生根苗置于4℃冰箱低温暗处理30 d,然后,转至室温下瓶内炼苗1周;最后,用清水洗净附在根系上的培养基,整个过程尽量避免对小苗造成机械伤害。移栽前将组培苗放入稀释800倍的多菌灵、百菌清等杀菌剂溶液中消毒 1~2分钟,然后植于穴盘中。往后根据天气情况每天给小苗浇一定的水,但必须防止小苗带水过夜,造成积水烂苗;苗床周围保持60%~70%的湿度,1~2 个周后可酌情施肥。
5 牡丹组培苗质量标准
5.1  评价原则
组培苗产品质量的划分,采用规格等级和形态等级相结合的分级方法。
规格等级:以所规定的生根率、苗高、叶片数、单株生根数等数量指标进行分级。
形态等级:根据组培苗的形态指标,如茎、叶生长状况、愈伤组织多少、污染情况等指标进行分级。
3.2  瓶内生根苗质量标准
3.2.1 综合标准
瓶内合格生根苗应具有明显的新鲜根系,苗茎健壮、充实,叶片大小协调、色泽正常,无污染。
3.2.2 分级标准
见附表1。
4.3 组培移栽苗质量标准
4.3.1 综合标准
合格移栽苗应具有完整而发达的根系,苗干健壮、木质化或半木质化,叶片大小、色泽正常,无机械损伤,无病虫害。
4.3.2 分级标准
见附表2。
5 抽样与检测
5.1 抽样
同一批次的产品作为一个检测批次,抽检样本应从提交的检查批中随机抽取,检测比例见附表3。
5.2  检测
5.2.1  检测规则
种苗成批检验,检验工作限在产地进行。
5.2.2 检测方法
组培苗茎、叶、根生长状况和整体效果通过目测检测;苗高用直尺测量,单位厘米;叶片数、生根数用阿拉伯数字表示,单位片、条;生根率用百分数表示。
5.2.3  检验允许范围
同一批次中低于该等级的种苗数量不得超过5%(适用于组培移栽苗)。检验结果不符合规定的,重新分级。
6 包装与运输
组培瓶内生根苗和营养钵中的移栽苗长途运输前,将培养瓶或营养钵装入塑料箱内挤实,避免运输过程中剧烈振动;组培移栽苗每100株一捆,根部蘸满泥浆,用草袋或塑料袋好。挂上标签,注明品种、等级、规格、产地等。


附录
 
图1 牡丹微繁殖技术流程
 
表1 牡丹组培瓶内生根苗质量等级表
等级 生根率(%) 苗高(cm) 根数(条) 其它
一级 ≥90 ≥4 ≥3 基部基本无愈伤组织
二级 ≥75 ≥3 ≥2 基部基本无愈伤组织
三级 ≥60 ≥2 ≥1 基部有轻微愈伤组织
 
 
表2 牡丹组培移栽苗质量等级表
等级 苗高(cm) 叶片数(片) 根数状况 其它
一级 ≥6 ≥2 完整、发达、新鲜 无病虫害
二级 ≥4 ≥1 完整、发达、新鲜 无病虫害
 
 
表 3 抽样表
组培苗株数 检测比例
≤1000 5%
1001~5000 3%
5001~10000 2%
≥10001 1%
 
 
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